细胞污染（细胞污染点点状像沙子一样）

今天给各位分享细胞污染的知识，其中也会对细胞污染点点状像沙子一样进行解释，如果能碰巧解决你现在面临的问题，别忘了关注雾霾网(wumai.net)，现在开始吧！

本文目录一览：

• 1、细胞污染后怎么处理
• 2、细胞培养中如何识别细胞污染？
• 3、为什么培养的细胞老是污染，我之前养都不会污染，就被
• 4、怎么知道细胞有没有被污染
• 5、细胞培养细胞总是污染，我该怎么办
• 6、细胞污染的常见类型及预防措施

细胞污染后怎么处理

细胞污染分几种情况，处理方法不同。

细菌污染处理方法：

在培养基中加入抗生素处理，可以用四环素，庆大霉素，或者链霉素，前两者的工作浓度是50 μg/mL;链霉素的工作浓度是100 μg/mL。但是，细胞本身也有影响，状态大不如从前，所以，防范于未然，正确操作、严格执行无菌操作规范，定期清理消毒培养设施才是关键!

二、真菌污染

：真菌污染培养液清亮透明。

处理方法：赶紧扔掉，不要再想挽救，即使再珍贵。然后彻底消毒灭菌培养间，CO2孵箱，器皿和培养液。

三、霉菌污染

同真菌感染一致，因为培养液是清亮的，所以霉菌污染早期难以发现，等发现时往往已经为时过晚了。培养液中慢慢地出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物。

处理方法：建议果断舍弃该污染细胞，将环境彻底消毒，因为霉菌的顽固可能会导致下几批细胞都会污染，所以，采用酒精彻底底地擦洗一遍CO2孵箱。然后再用新洁尔灭擦洗一遍，把水盘里加上饱和量的硫酸铜。千万不可大意!

四、支原体感染

：培养液变浑浊，支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是细胞状态变差、生长变慢，在显微镜下观察可能会有小黑点。

处理方法：

如果不是很珍贵的细胞的话，建议直接扔了吧。还是那句话，预防为主。

细胞培养中如何识别细胞污染？

细胞培养中细胞发生污染就是一个灾难，既耽误时间又伤神，熟练的无菌操作能避免许多问题，但早期检测污染也是一种可以预警的方法。对于培养箱中的每瓶细胞都要注意观察，要养成习惯，每次打开培养箱时，迅速看看有没有发生污染。

细菌、酵母、真菌、霉菌、支原体以及其他的培养细胞都可能引起污染。

一、肉眼观察

肉眼观察，把培养瓶或培养皿拿起来，对着光线检查。

浑浊情况。 即使细胞密度很高，培养基也应该是透明的。轻轻移动或晃动培养瓶，观察培养基的浑浊或悬浮情况，一些霉菌可能会在培养基的表面形成菌落。

培养基颜色的变化。 酸性条件下，加了酚红的培养基会由红变黄，而碱性条件下会变成红紫色。细菌污染常常会使培养基变成黄色，真菌污染会使培养基变成深紫红色。

闻！ 当然不能打开瓶子去闻，把鼻子贴在瓶口闻，许多污染发生以后都会散发出易察觉的、特殊的气味，甚至一打开培养箱门就闻到了。

二、显微观察

显微观察。在倒置显微镜下，先用低倍(10X) 再用高倍(40X) 物镜（总放大倍数为400) 观察细胞培养皿或培养瓶中的细胞。

其他有机体。 在低倍镜下，真菌的菌丝体成长棒状，并横穿整个视野，还可以观察到酵母，有时呈小圆球形，有时还有芽。在高倍镜下可以观察到细菌，它们可能是棒状或球状，单独成链或成团存在，它们也可能和细胞混在一起，并且明显处于细胞内部，有些细胞可能已经裂解变得模糊。观察时可能每两个视野才出现一个污染（当然也算被污染了！），而且可能污染物是可以运动的。

损伤细胞。 感染会杀死细胞，可能导致每个细胞都裂解和／或细胞层从附着物上完全剥离，更可能的是细胞变得不规则（或大或小），在低倍镜下是黑色的粒状。

悬浮培养细胞比贴壁培养细胞更加难以显微观察，尤其是高倍显微镜下。

将培养瓶或培养皿放在显微镜的载物台上，静置一会。

将焦距对准器皿的底部，观察那些轻微附着的细胞，因为它们可能已经接触到了微生物。

对准整个培养瓶焦距，当发现细胞的时候，用细聚焦调节旋钮调节，仔细检查周围的培养基有没有污染发生。

三、交叉污染

细胞还可能被别的细胞污染，这种交叉污染可能更广泛，许多实验人员在不经意之间培养、使用和冻存了其他的细胞。

如何避免交叉污染：

只从有保障的地方得到细胞，或者自已检查细胞。

不要同时操作多株细胞。不要把多种培养瓶同时放在超净台内。

不要使用同一个移液管操作多种细胞。

不同细胞株不要使用同一瓶培养基或胰蛋白酶。

操作后不要把移液管放回培养基的瓶中。

培养维护时，使用栓塞式移液管。

四、支原体污染

支原体污染 是一种很难发现却经常存在的问题。

支原体是最小的（0.3 μm）能够自我复制的有机体，倒置显微镜下通常观察不到。

支原体没有细胞壁，对常用的抗生素不敏感。支原体感染是极为不易察觉的，可能直到出现了可以观察到的病变或发现细胞正常功能丧失的时候，才意识到是发生了支原体感染。

在没有采用特殊的染色方法，也没有观察到病变的情况下，实验总是不成功，就应怀疑被支原体污染。预防支原体污染的惟-途径是经常对细胞进行筛选。

支原体个体很小，需要使用透射电镜才能清晰看到其结构及分布。

注意：如果你发现了支原体污染

最好的方法是立即把细胞丢弃，从新复苏。

可以不理会它。

可以采取某些挽救措施，但是会很困难，只适用于那些不可代替的细胞。最简单的方法是订购 支原体清除试剂盒 。

如果你不能确定是否发生了污染

制作湿涂片或染色片。取1 ml 培养基离心，用50 μl 培养基或缓冲液重新悬浮细胞，滴一滴到载玻片，盖上盖玻片制成湿涂片；或涂片、固定并染色（甲基兰或革兰氏染液），在高倍镜下观察。

将细胞在营养培养基或琼脂培养基上划线， 37℃培养3 天。如果有菌落，那么细胞被污染了。

取1 ml 的细胞培养液至无菌的微量离心管中， 37℃培养3 天。观察到浑浊物，做湿涂片显微镜观察。

为什么培养的细胞老是污染，我之前养都不会污染，就被

细胞污染以后最好是将细胞立刻处理掉,并将整个实验室进行清理.

细胞污染可能原因：

天气太热，实验者在培养和接种或者换液时出汗（有空调稍好，但是手也出汗）。

培养间里可能暗藏污染原。

注意培养箱（这点最重要），仔细检查培养箱里的隔板的下面，有可能有霉菌斑。

培养基污染多数是配置过程中造成的，仔细检查配置过程用到的器具。

解决办法：

彻底清洁培养间，显微镜室。然后，紫外灯多照射一端时间消毒空气。

彻底清洁培养箱：（1）每个隔板仔细清洗，火烤。（2）培养箱大换水，换成新鲜干净的蒸馏水。（3）培养箱内壁用酒精棉球或者稀过氧乙酸认真擦洗。（4）紫外灯长时间照射（一天）。

实验用器械消毒：注意消毒时间和压力，有必要检查压力锅和校正压力表是否准确。

一次性手套在打开使用前一天放入无菌间照射消毒。

如果用双抗，应该现用现配。

注意过滤器的消毒灭菌。

检查培养间和超净台的通风过滤网，如果脏了，需要更换。

怎么知道细胞有没有被污染

细胞污染很多种，不同种细胞污染表现不同，可能检测方法不同。不过大部分污染用肉眼加镜检就可以解决。

细胞污染一般分细菌污染，真菌污染，支原体污染，黑胶虫等。

细菌污染：pH升高培养基变黄，培养基严重浑浊，镜下可见细菌游动；

真菌污染：培养液短期内多不浑浊，有肉眼可见漂浮物，镜下细胞间有菌丝体，生长变慢，时间长细胞死亡；

支原体污染：细胞生长一般无可见变化，可用支原体检测试剂盒检测支原体污染（现在市场上有卖，有检测支原体DNA的，灵敏度高但过程复杂；非检测DNA的过程简单）

黑胶虫：培养液不浑浊，细胞生长影响不大，镜下有小黑点做布朗运动；

细胞培养细胞总是污染，我该怎么办

细胞培养最关键的还是操作，如果操作规范的话，污染几率是很小的，如果在培养的时候总是有黑色点状物质，可以考虑是不是细胞碎片或者血清里的蛋白质沉淀。

细胞污染可能原因：

1.天气太热，实验者在培养和接种或者换液时出汗（有空调稍好，但是手也出汗）。

2.培养间里可能暗藏污染原。

3.注意培养箱（这点最重要），仔细检查培养箱里的隔板的下面，有可能有霉菌斑。（我以前遇到过）

4.培养基污染多数是配置过程中造成的，仔细检查配置过程用到的器具。

5.血清过期一个月，如果保存的好应该没有问题，但是保存不好，新来的血清，用一次就可能污染。血清过期和污染是否有必然的联系不好说，我们觉得联系不大。

解决办法：

1.彻底清洁培养间，显微镜室。然后，紫外灯多照射一端时间消毒空气。

2.彻底清洁培养箱：（1）每个隔板仔细清洗，火烤。（2）培养箱大换水，换成新鲜干净的蒸馏水。（3）培养箱内壁用酒精棉球或者稀过氧乙酸认真擦洗。（4）紫外灯长时间照射（一天）。

3.实验用器械消毒：注意消毒时间和压力，有必要检查压力锅和校正压力表是否准确。

4.一次性手套在打开使用前一天放入无菌间照射消毒。

5.如果用双抗，应该现用现配。

6.注意过滤器的消毒灭菌。

7.经验告诉我们过期1年内的血清，只要保存妥当，其实血清的效价是不会降低的；还有刚购买的大规格的血清收到后，避免反复冻融，血清分装的时候要无菌分装，转入无菌间，在超净台内将血清分装入50-100ml血清瓶中封口，并于-20℃保存备用。分装时注意：① 预先要将血清轻轻摇动数周、混匀；② 用吸液管吹出血清时要注意：③ 不要吹出气泡，血清很粘稠，很容易产生气泡。如果产生气泡，则在酒精灯火焰上过一下。

8.检查培养间和超净台的通风过滤网，如果脏了，需要更换。

细胞污染的常见类型及预防措施

一、支原体污染

识别支原体污染。 这是一种很难发现却经常存在的问题。支原体是最小的(0. 3μ.m)能够自我复制的有机体，倒置显微镜下通常观察不到。支原体没有细胞壁，对常用的抗生素不敏感。支原体感染是极为不易察觉的，可能直到出现了可以观察到的病变或发现细胞正常功能丧失的时候，才意识到是发生了支原体感染。

不采用特殊的染色方法，也没有观察到病变但是实验总是不成功，就应怀疑被支原体污染。预防支原体污染的唯一途径是经常对细胞进行筛选。

防止支原体感染。 只使用那些证明没有污染支原体的血清和培养基，许多公司都作出了这样的保证。只接受那些保证没有支原体感染的细胞，通过商业手段得到的细胞很容易做到，但是从别处索要时就一定注意，要直接询问他是否验证过没有支原体感染。

对细胞进行日常的筛选是很重要的。虽然这样做很麻烦，但当你怎么样也得不到一种细胞表面蛋白的抗体，或不能有效地表达某种蛋白质时，可能是由于一直在使用被支原体感染的细胞。

检测支原体感染。 如果这株细胞对你十分重要，那么就应该每4~6 周对细胞进行检测，通常使用下面几种方法：

支原体的荧光染色 是最简单、最便宜也是最常用的方法。

使用支原体的特异引物进行PCR 检测 。如果实验室具备PCR 仪和电泳条件，那么这种方法可能是最简单的手段。可以自己设计引物（设计好恰当的对照），也可以从公司购买引物。

把细胞样品送到能进行支原体检测的公司检测 。这样做虽不如自己检测快（尽管托给公司比较容易，但会很贵），但你不需要自己动手。

如果你发现了支原体污染……祝你好运！

最好的方法是立即把细胞丢弃，重新复苏。

可以不理会它。

可以采取某些挽救措施，但是会很困难，只适用于那些不可代替的细胞。最简单的方法是订购除去支原体的试剂盒，并且联系公司咨询他们的意见。

二、交叉污染

细胞还可能被别的细胞污染，这种交叉污染可能更广泛，许多实验人员在不经意之间培养、使用和冻存了其他的细胞。

这种污染是可以避免的。

只从有保障的地方得到细胞 ，或者自己检查细胞，许多公司也可以检查。

不要同时操作多株细胞 。不要把多种培养瓶同时放在超净台内。

不要使用同一个移液管 操作多种细胞。

不同细胞株 不要使用同一瓶培养基 或胰蛋白酶。

操作后 不要把移液管放回培养基的瓶中 。

培养维护时， 使用栓塞式移液管 。

如果你的细胞生长情况或功能突然发生了变化，在排除支原体污染后，检查你的细胞是否发生了交叉污染（这些变化也可能是发生了突变或漂变） 。

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