细胞污染的检测方法（细胞污染还能测序吗）

今天给各位分享细胞污染的检测方法的知识，其中也会对细胞污染还能测序吗进行解释，如果能碰巧解决你现在面临的问题，别忘了关注雾霾网(wumai.net)，现在开始吧！

本文目录一览：

• 1、细胞培养中如何识别细胞污染？
• 2、细胞培养中的支原体污染用什么方法能更快的检测呢？
• 3、求问养细胞时，被细菌、真菌污染了怎么检测啊？
• 4、细胞污染支原体pcr检测是提rna还是dna
• 5、如何检测培养细胞霉菌和细菌的污染

细胞培养中如何识别细胞污染？

细胞培养中细胞发生污染就是一个灾难，既耽误时间又伤神，熟练的无菌操作能避免许多问题，但早期检测污染也是一种可以预警的方法。对于培养箱中的每瓶细胞都要注意观察，要养成习惯，每次打开培养箱时，迅速看看有没有发生污染。

细菌、酵母、真菌、霉菌、支原体以及其他的培养细胞都可能引起污染。

一、肉眼观察

肉眼观察，把培养瓶或培养皿拿起来，对着光线检查。

浑浊情况。 即使细胞密度很高，培养基也应该是透明的。轻轻移动或晃动培养瓶，观察培养基的浑浊或悬浮情况，一些霉菌可能会在培养基的表面形成菌落。

培养基颜色的变化。 酸性条件下，加了酚红的培养基会由红变黄，而碱性条件下会变成红紫色。细菌污染常常会使培养基变成黄色，真菌污染会使培养基变成深紫红色。

闻！ 当然不能打开瓶子去闻，把鼻子贴在瓶口闻，许多污染发生以后都会散发出易察觉的、特殊的气味，甚至一打开培养箱门就闻到了。

二、显微观察

显微观察。在倒置显微镜下，先用低倍(10X) 再用高倍(40X) 物镜（总放大倍数为400) 观察细胞培养皿或培养瓶中的细胞。

其他有机体。 在低倍镜下，真菌的菌丝体成长棒状，并横穿整个视野，还可以观察到酵母，有时呈小圆球形，有时还有芽。在高倍镜下可以观察到细菌，它们可能是棒状或球状，单独成链或成团存在，它们也可能和细胞混在一起，并且明显处于细胞内部，有些细胞可能已经裂解变得模糊。观察时可能每两个视野才出现一个污染（当然也算被污染了！），而且可能污染物是可以运动的。

损伤细胞。 感染会杀死细胞，可能导致每个细胞都裂解和／或细胞层从附着物上完全剥离，更可能的是细胞变得不规则（或大或小），在低倍镜下是黑色的粒状。

悬浮培养细胞比贴壁培养细胞更加难以显微观察，尤其是高倍显微镜下。

将培养瓶或培养皿放在显微镜的载物台上，静置一会。

将焦距对准器皿的底部，观察那些轻微附着的细胞，因为它们可能已经接触到了微生物。

对准整个培养瓶焦距，当发现细胞的时候，用细聚焦调节旋钮调节，仔细检查周围的培养基有没有污染发生。

三、交叉污染

细胞还可能被别的细胞污染，这种交叉污染可能更广泛，许多实验人员在不经意之间培养、使用和冻存了其他的细胞。

如何避免交叉污染：

只从有保障的地方得到细胞，或者自已检查细胞。

不要同时操作多株细胞。不要把多种培养瓶同时放在超净台内。

不要使用同一个移液管操作多种细胞。

不同细胞株不要使用同一瓶培养基或胰蛋白酶。

操作后不要把移液管放回培养基的瓶中。

培养维护时，使用栓塞式移液管。

四、支原体污染

支原体污染 是一种很难发现却经常存在的问题。

支原体是最小的（0.3 μm）能够自我复制的有机体，倒置显微镜下通常观察不到。

支原体没有细胞壁，对常用的抗生素不敏感。支原体感染是极为不易察觉的，可能直到出现了可以观察到的病变或发现细胞正常功能丧失的时候，才意识到是发生了支原体感染。

在没有采用特殊的染色方法，也没有观察到病变的情况下，实验总是不成功，就应怀疑被支原体污染。预防支原体污染的惟-途径是经常对细胞进行筛选。

支原体个体很小，需要使用透射电镜才能清晰看到其结构及分布。

注意：如果你发现了支原体污染

最好的方法是立即把细胞丢弃，从新复苏。

可以不理会它。

可以采取某些挽救措施，但是会很困难，只适用于那些不可代替的细胞。最简单的方法是订购 支原体清除试剂盒 。

如果你不能确定是否发生了污染

制作湿涂片或染色片。取1 ml 培养基离心，用50 μl 培养基或缓冲液重新悬浮细胞，滴一滴到载玻片，盖上盖玻片制成湿涂片；或涂片、固定并染色（甲基兰或革兰氏染液），在高倍镜下观察。

将细胞在营养培养基或琼脂培养基上划线， 37℃培养3 天。如果有菌落，那么细胞被污染了。

取1 ml 的细胞培养液至无菌的微量离心管中， 37℃培养3 天。观察到浑浊物，做湿涂片显微镜观察。

细胞培养中的支原体污染用什么方法能更快的检测呢？

用扫描电镜方法简便快速.

①相差显微境检测：将细胞按种于事先放置于培养瓶内的盖玻片上，24h后取出，用相差油镜观察．支原体呈暗色微小颗粒位于细胞表面和细胞之间。

②荧光染色法：荧光染色用能与DNA特异性结合的荧光染料Hoechst 33258，可使支原体内含有的DNA着色，染色后用荧光显微镜观察。具体方法如下：首先将细胞接种盖玻片上，在细胞未长满前取出玻片，用不合酚红的Hanks液漂洗一下，用l： 3醋酸甲酵固定10Min，然后用生理盐水漂洗．置于用生理盐水配浓度为50pg／ml的Hoechst 33258中染色10min。染色后用蒸溜水洗1—2min．向细胞面滴加pH5．5磷酸缓冲液数滴，然后置荧光显微镜下观察。镜下支原体为散在于细胞同围或附于细胞膜表面的亮绿色小点。

③电镜检查；用扫描电镜方法简便快速．也可以利用透射电镜。

④DNA分子条文检查或支原体培养等方法：检出率高．但方法较为复杂

求问养细胞时，被细菌、真菌污染了怎么检测啊？

细菌、真菌污染常在传代、换液、加样等开放性操作之后发生，而且增生迅速，若有污染，在48小时内可明显观察到，例如培养液变混浊，或略加振荡有很多漂浮物漂起。

(2)镜下观察

在倒置显微镜的高倍镜下可见培养液中有大量圆球状颗粒漂浮，即为细菌污染。若细胞之间有丝状、管状、树枝状或卵形的物质常为真菌污染。

采用普通肉汤接种或用未加双抗药物的培养液接种，也可发现是否有污染。

细胞污染支原体pcr检测是提rna还是dna

支原体是一种大小仅为0.2~0.3 um，无

细胞壁，可透过一般过滤膜（0.22-0.45 um）的原核生物，在细胞培养过程中，支原体感染发生率达到63%，因而细胞培养过程中被支原体污染是一个世界性的难题。当细胞（特别是传代细胞）被支原体污染后，细胞内的DNA、RNA及蛋白表达发生改变，而细胞的生长率一般并未发生显著的影响，因而细胞被支原体污染一般难以察觉。 一般根据支原体种类不同，采取不同的方法进行检测。目前常用的检测方法有：

1. 试剂盒检测法：

目前已有专门做支原体检测的试剂盒，可以用细胞滴片进行检测。

2. 观察细胞的形态和生长特征：

支原体污染比较严重时可出现生长减慢，有的培养基pH明显变酸，并出现细胞病变，以此可依次对支原体污染进行检测，但有些情况下支原体污染引起的病变特征与病毒感染相似，因此不能准确诊断。

3. 分离培养法：

大多数支原体可出现特有的典型菌落。因而可依次尽心检测，该方法准确、可靠，但时间长，敏感性不够高。

4. DNA结合荧光素染色法：

利用荧光染剂（bisbenzimide,Hoechst 33258）侦测支原体污染。荧光染料会结合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich区域，因为支原体DNA中A-T含量占多数（55～80%），所以可将其染色而侦测。被支原体污染之细胞经染色后，在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之荧光小点，即为支原体之DNA，证明有支原体之污染。

5. 电子显微镜和免疫电子显微镜法：电子显微镜或者免疫电镜下对样本进行观察，此法较准确，但受条件限制，时间长，敏感性不高。

6. 间接免疫荧光法和免疫印迹：简便、快速、特异性强。

如何检测培养细胞霉菌和细菌的污染

如何检测培养细胞霉菌和细菌的污染

1 霉菌污染后多数在培养液中形成白色或浅黄色漂浮物。一般肉眼可见，较易倍发现，短期内培养液多不浑浊，倒置显微镜下可见细胞之间有纵横交错穿行的丝状、管状及树枝状菌丝，并悬浮漂荡在培养液中。很多菌丝在高倍镜下可见到有链状排列的菌株；念珠菌或酵母菌形态呈卵形，散在细胞周边和细胞之间生长。有时通过显微镜观察可能发现瓶底外面生长的菌丝，不要错当培养瓶内的污染。瓶外的污染物，需及时用乙醇棉球擦洗清除，以防其通过瓶口传入瓶内。

2 培养细胞的污染一旦明确，多数将无法救治。如果污染的细胞不是具有重要价值，一般发现污染后应尽快弃之，以防污染扩大影响其他细胞。

3 如为霉菌污染可以考虑采用制霉菌素25ug/ml或酮康唑10ug/ml对细胞进行处理。

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